全miRNA敲除库的用途
 

       CRISPR/Cas9作为当今基因编辑领域最热门的明星工具，自2014年以来，多篇CNS(Cell、Nature、Science)连续报道了基于CRISPR/Cas9的高通量筛选技术。本公司的基于CRISPR/Cas9的全miRNA敲除库（人）可以用于药物敏感miRNA、耐药性相关miRNA、肿瘤细胞增殖关键miRNA、肿瘤转移相关miRNA、放疗耐受相关miRNA、细胞对致死致病原感染敏感关键miRNA的高通量功能性筛选等。

 

全miRNA敲除库（人）介绍

 

       全miRNA敲除库（人）为慢病毒载体文库，载体骨架是lentiCRISPR v2（Addgene，52961）。lentiCRISPR v2能够表达sgRNA、Cas9和Puro抗性基因。慢病毒载体形式的文库能够提高感染与敲除效率，而且同时表达sgRNA和Cas9的单一载体能够应用于任何感兴趣的细胞类型，而不需要首先产生表达Cas9的细胞系。全miRNA敲除库（人）具有278个sgRNA结构，靶向人类基因组中272个miRNA，具有6个对照sgRNA（在基因组中没有靶位点）结构。

 

 

 全miRNA敲除库（人）的使用方法
 

1、全miRNA敲除库（人）慢病毒包装。
2、慢病毒粒感染目标细胞，Puro筛选阳性细胞。
3、药物筛选或者辐射处理等，对照组不处理或者虚假处理。
4、提取基因组DNA，PCR扩增sgRNA的编码序列。
5、sgRNA的编码序列高通量测序。
6、比较对照组和实验组的高通量测序结果，筛选感兴趣的sgRNA。
7、单独验证筛选出来的sgRNA靶向的miRNA。

 

全miRNA敲除库（人）出货说明

 

1、全miRNA敲除库（人）20μg，浓度500ng/μL以上，超螺旋率95%以上。
2、全miRNA敲除库（人）说明书一份。
3、出货周期：1-2周。