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microRNA芯片技术服务
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microRNA芯片技术服务
PIPES指数:1.0用户:应用:

型号型号:microRNA芯片技术服务

品牌品牌:拓普生物

产地产地:广东

深圳市拓普生物科技有限公司

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产品描述

                       Small RNA,即小 RNA,是一类大小约 18~40 个碱基的单链小分子 RNA,主要包括 microRNA(miRNA)、piRNA、snoRNA、snRNA、tRNA 等。小 RNA 在细胞内有重要的调控功能,具有作为疾病诊断标记物戒药物靶标的潜力,被广泛研究。
microRNA(miRNA)属于small ncRNAs,是单链的短RNA,长度在22nt左右。microRNA是基因表达的主要调控分子,以序列互补的方式与特意靶mRNA结合,通过降解靶mRNA或抑制其蛋白翻译调控靶基因的表达。microRNA不但在基本的生物过程,如发育,应激反应,代谢和基因组完整性维持等方面有基本而且重要的调控作用。在疾病的发生发展全过程中也发挥着重要的调控作用。
一:实验流程
1. 样品RNA 抽提
    a. 实验对象为组织样品,取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,使用BioPulverizerTM冰冻粉碎组织,加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),使用Mini-Bead-Beater-16匀浆后抽提RNA。
b. 实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,加1ml的RNA抽提试剂Trizol(样品为贴壁细胞,每10cm2培养皿Trizol使用量为1ml),裂解后抽提RNA。
2. RNA 质量检测
    a. 使用Nanodrop测定RNA 在分光光度计260nm 、280nm和230nm的吸收值,以计算浓度并评估纯度。
    b. 用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA 纯度及完整性。
    c. 提供RNA QC报告。
        注意:用于芯片检测的RNA 样品,必须是高质量的,完整的,没有RNase污染(降解的样品不能用于标记和芯片检测),没有基因组污染。
3. 制备荧光标记探针
    采用miRCURY™ Array Power 标记试剂盒,用标记酶将Hy3™或Hy5™荧光基团标记miRNA,可以得到用于与芯片杂交的荧光探针。
4. 芯片杂交
    在标准条件下使用PhalanxTM的热收缩杂交袋将标记好的探针和miRCURY™芯片杂交。
5. 图像采集和数据分析
    使用GenePix 4000B 芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度,并将实验结果转换成数字型数据保存,使用配套软件对原始数据进行分析运算。
6. 提供实验报告
   包括详细的实验方法和芯片实验数据和图表
 


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