KnockGene的慢病毒产品，能在mRNA、蛋白水平均满足您对敲低效率的要求。我们擅长RNAi、CRISPR等敲除、敲低技术。比如：KnockGene的单载体CRISPR等技术能省去一次不必要的繁琐筛选、单克隆筛选工作，为后续实验节约时间。这样的病毒用在原代细胞实验上，让您更加放心。好的载体，让您的后续实验高枕无忧。

我们可为您设计，有以下要求的载体：

u  过表达，调控表达（对表达量有比较严格的要求）

u  敲低，RNAi，CRISPR

u  稳定转染，永久转染，传代细胞转染，原代细胞转染，在体转染

u  单载体CRISPR

u  多基因表达，长ORF

u  组织特异性表达，靶向性转染，cell targeting

u  非整合型慢病毒

u  全实验过程中涉及多个筛选基因的设计

u  全实验过程中涉及多个报告基因的设计

u  基因治疗载体的优化

除了设计各种难以程度不同载体之外，我们也乐于为大家提供实验方面的咨询，分享我们团队十多年来在各类实验中积累的经验，帮助大家克服实验中遇到的问题。欢迎联系：

案例  原代造血干细胞中CRISPR基因敲除

客户需求：在分离的原代造血干细胞中，使用CRISPR技术敲除掉目的基因，并且要尽可能的花更少的时间完成这一目的。

难点：   CRISPR的慢病毒由于Cas9基因本身比较大，达到4100bp以上，因此通常是采用双病毒载体，一个载体表达Cas9，另一个载体表达sgRNA，对细胞转染两次以后才能完成基因敲除。对于原代造血干细胞来说，本身体外培养时间有限，前面两次转染和筛选会消耗大量的时间，使得后面没有足够的时间完成实验。有一些慢病毒载体可用于单载体CRISPR应用，例如常见的LentiCRISPRv2，但是这些载体包装的病毒滴度太低，通常只有10⁵TU/ml量级，对于本来难转的原代细胞就很麻烦。

结果：使用我们独有的单载体CRISPR，构建了两个靶点的病毒载体，并且包装病毒。初始滴度均能达到10⁶ TU/ml以上。浓缩以后能够成功的转染细胞，使用载体带有的puromycin抗性进行筛选，获得稳定转染敲除病毒的细胞。在转染后7天的时候取细胞进行WB分析，两个靶点均有效的完成了目的基因的敲除，分别达到70%和90%以上。此载体在不需要单克隆筛选的情况下即完成了基因敲除，使这些难于实现的实验变得可行。

北京科诺科服生物科技有限公司

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