细胞系基因靶向操作服务
基因敲除敲入技术一直是研究特定基因功能的有效工具。沐赛生物利用zei新的CRISPR/Cas系统可以有效的实现对细胞系特定基因的敲除和定点突变。
技术原理
ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats(CRISPR)/Cas是细菌和古细菌不断进化而获得的免疫防御机制,其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系统通过小导向RNA(sgRNA)对切割区域进行识别,进而利用Cas9内切酶实现靶向区域的切割以产生DNA双链断裂。该系统灵活简单,可实现多个靶点的同时操作。目前我们采用DoubleNicking技术,显著降低脱靶率。
我们利用该技术,定点敲除和修饰各种细胞系中的特定基因。对打靶细胞进行药物筛选,利用CRISPR/Cas系统获得的基因敲除细胞的剔除效率会明显高于常规的利用RNAi和shRNA介导的基因敲落。
技术特色
1.可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除
2.zei新Nickase酶/双gRNA技术,显著降低脱靶率
3.无种属限制,适用于各种细胞系的靶向敲除
4.服务周期短,2个月即可交付阳性细胞
服务流程及周期
靶向目标序列gRNA的设计及载体构建
目标细胞系共转染
阳性细胞株的筛选和鉴定
应用范畴
基因功能分析:在细胞水平研究基因的功能
定点突变::建立点突变细胞,可用于药物靶点研究。
启动子功能分析:该方法建立的启动子分析系统,可有效地分析内源性启动子的强度,是一种最理想的分析系统。
威斯腾实验服务流程
威斯腾生物服务项目
分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
ELISA(酶联免疫吸附法)技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
染色质免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
SILAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
高血压模型 | ||
病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
膜片钳实验 | ||
细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
细胞成管实验 | ||
病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本) |
Tunel(原位末端凋亡法)检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片(限人和小鼠来源样本) |
激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
免疫荧光 | ||
Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等) | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
常规药物体外筛选 |