常规（HE）染色

常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。

一、染色目的

病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。

二、染色的作用

1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。酸性染料中有染色作用的为阴离子；碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。

2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。

    一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。

三、染色方法及步骤
1．人工苏木素，伊红染色法（HE法）
(1)切片浸入二甲苯中5-10min；
(2)切片浸入二甲苯中5-10min；
(3)100%酒精1min。
(4)100%酒精1min。
(5)95%酒精1min。
(6)95%酒精1min。
(7)90%酒精1min。
(8)80%酒精1min。
(9)自来水洗1min。
(10)浸入苏木素染液浸染10-15min。
(11)自来水洗30second-1min。
(12)1%盐酸酒精分化30second。
(13)流水冲洗15min以上。
(14)1%伊红酒精染3-5min。
(15)90%或95%酒精分化30sec。
(16)95%酒精30sec-1min。
(17)95%酒精30sec-1min。
(18)95%酒精30sec-1min。
(19)100%酒精1min。
(20)100%酒精1-2min。
(21)碳酸二甲苯1min。
(22)二甲苯1-2min。
(23)二甲苯1-2min
(24)二甲苯1-2min。
(25)中性树胶封固。结果：细胞核被染成深蓝黑色；细胞浆被染成粉红色；软骨及钙盐被染成蓝色；胶原纤维染成淡粉红色，嗜酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色；弹力纤维呈淡粉红色；某些蛋白性物呈粉红色等。

染色时的注意事项：

1.切片用二甲苯脱腊，应视不同的季节有不同的脱蜡时间，在夏天，室温较高，脱蜡较迅速，往往在2-3min就可脱蜡干净，二在冬季，时间应相对延长。

2.切片在进入二甲苯前，可用电吹风吹切片，使切片上的蜡处于熔解状态，这样脱蜡较迅速，尤其是冬天，此法更可行。

3.切片上的蜡一定要清除彻底干净，否则将影响染色，造成切片染色不均的现象。

4.切片进行无水化处理，这一步骤，一是可增加切片的附帖，二是可延长苏木素的使用寿命。切片用二甲苯脱蜡后，不能直接水洗，因二甲苯不溶于水，必须经过酒精，酒精可溶解二甲苯，又能与水混合，按照以前教科书的要求，切片在整个染色过程中，都不要让其干燥。经过多年的实践及经验，笔者认为，切片用酒精将二甲苯彻底消除后，在进入苏木素染液前，可用电吹风吹干，这一步对于切片没有充分的烤片时间，对于血块等的切片来说，尤为重要，切片经此步骤，增加了附贴的牢固性，减少切片在染色过程中脱离载片的机会，保证了染色的成功率。另者，切片进入苏木素染液全无水，可保证了苏木素染液的浓度和PH值，延长其使用寿命。以往切片进入苏木素染液前，都须经水洗，每次染色，都带入不少的水分，稀释了苏木素染液的浓度，改变了它的PH值，使染液寿命缩短。

5.切片无水化除了用电吹风外，还可用火烧，切片用90%酒精洗后，取出切片，用火轻烧，也可达到切片的无水化。火对切片有损害吗？否，经实验证明，切片火烧时最高温度为80℃左右，对切片没有影响。用火烧时必须彻底清除二甲苯，因为二甲苯燃烧时可产生浓烟，如果存留于切片，将会影响观察。当然，用火时应特别注意防火，因为病理技术室的大部分试剂都为易燃品。

6.苏木素染液中的最佳染色时间，确切地回答还是比较困难的，因为各种组织都有不同的染色时间，核的染色时间从30sec至15min不等。对于核的染色，为了充分地显示各种核染色质，一定要过染，尤其对于初学者来说，更是如此。

7.苏木素染液有多种，常规应用的通常为明矾苏木素，明矾苏木素又有Harris苏木素，Mayer’s苏木素，和Ehrish苏木素等。

8.盐酸酒精分化切片，浓度有0.25%,0.5%和1%根据各人的情况而使用。这一步主要是将过染的颜色及不该染的染色去除掉，这一步要掌握得当，必须靠经验，核的染色清楚与否靠分化这一招，分化过度，核染色淡，分化不足，核染色质一团，分不清。初学者应于显微镜下控制分化程度。

9.水洗蓝化，也可用温热水来促使切片蓝化，可用氨水，碳酸锂等化学药品来促蓝，虽然如此，自来水冲洗蓝化切片是最好的，这对于切片的保存较为有利。

10.伊红酒精浓度有0.25%,0.5%和1%之分，根据各单位的情况而定。切片一放入伊红染液，即可马上着色，但是，要染好切片，必须染够染足时间。

11.分化伊红须用浓度较高的酒精，以往伊红染色以后，用低浓度的酒精分化，洗去多余的染液，实践中发现低浓度的酒精褪色能力特强，如果掌握不好，染上的伊红，便会被褪去大部分。改用较高浓度酒精后，这种现象便不会出现。

12.作为切片脱水剂的酒精，要经常更换，尤其是无水酒精，更要保持其无水性。否则切片脱水不干净，含有水份就会褪色。切片取出后，不能令其干涸，即刻进行下一步。

13.石碳酸二甲苯，对于南方地区来说，是一种很有用的试剂，石碳酸吸水性强，用它可加强脱水，它是二甲苯与酒精之间的缓冲剂，切片经此试剂后更加透明和光亮。有人认为石碳酸为一种弱酸，切片用它后可能会褪色，这种担心是多余的，切片褪色，最主要是切片本身含有水份所导致。根据我们的实验，82年的切片经石碳酸处理后，17年来颜色仍然保持鲜艳就足以说明。

14.二甲苯须换三次，以确保切片的透明度，这对于切片的观察和保存，都大有好处。

15.封片时要做到：切片从二甲苯取出后，不使切片干涸。如果干涸，由于空气潮湿，封片时就保证不了切片的无水。如果切片上保留着一定量的二甲苯，二甲苯的特性不溶于水，它的存在使切片与空气隔开，切片无法跟潮湿空气接触，就可保证切片的无水，这时及时滴上中性树胶，切片就能完好地封好。

16.封片用的中性树胶，不能过稠，也不能过稀，过稠胶难以伸展开，并容易产生气泡，影响封片的速度。过稀是因胶中含过多的二甲苯，封完切片后，胶一收缩及二甲苯挥发，切片就不能被完全封盖上，这都影响切片的质量。

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