简介   

建立稳定的细胞系，是对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，zei常用的真核表达基因载体的标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin），常用puro、G418进行选择性筛选。筛选得到的细胞可稳定表达目的蛋白，可以用于蛋白的扩增和富集，或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。传统的方法是直接转染DNA质粒后，进行药物筛选，该方法费时费力，假阳性高。目前汉恒生物公司已经淘汰了传统的直接转染DNA质粒筛选稳定株的方法，利用慢病毒可以整合到细胞基因组的特性，采用效率更高的慢病毒感染的筛选方法。

实验流程

首先构建带有抗性标志的慢病毒载体，包装慢病毒颗粒。同时使用相应的药物，并对所需筛选的细胞进行药物浓度测试，选择细胞全部凋亡时药物的zei低浓度。感染病毒后，在该浓度条件下进行筛选。10-14天后，挑取单克隆，扩增后通过RT-PCR检测mRNA表达情况或客户提供靶基因特异性抗体，汉恒生物提供Western Blot检测，根据蛋白表达情况，进一步筛选出稳定细胞株。

服务介绍

汉恒生物目前已经构建近300多种稳定细胞株，包括带有不同荧光蛋白：GFP，RFP，LUC等等。针对具有荧光标记而没有抗性标记的慢病毒载体，汉恒生物可以采用慢病毒感染，使用流式细胞仪分选的方式富集感染阳性的细胞。

汉恒生物有着多年构建稳定细胞株的经验，已在RAW264.7、U87-MG、CHG-5、HUH7、H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。

汉恒生物实例

 U87-MG

CHG-5（RNAi）