CRISPR /Cas9专家系统服务-Surveyor法及测序验证
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CRISPR /Cas9专家系统服务-Surveyor法及测序验证

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CRISPR/Cas9打靶基因后引入的突变的方式与ZFNTALEN基本一致,都是NHEJ或是HR。因此在CRISPR/Cas9的应用中,活性检测或是突变效率的检测可以参照ZFNTALEN方法.主要包括有:靶位点直接PCRTA克隆测序和基于可以识别错配双链的错配内切酶检测法(Surveyor法)。

 

Surveyor法即错配酶法:靶序列经CAS/sgRNA切割后由于缺乏修复模板,将主要以非同源重组的方式进行修复,或多或少会插入或删除一些碱基。因此将靶序列PCR扩增后经变性、退火,将形成错配。错配酶(主要是CEL1T7E1酶)将识别错配的杂合双链并剪切。产物跑电泳,比较切割条带与未切割条带的比例,即可反映出Cas/sgRNA的活性。

 

 

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Biomics CRISPR相关服务链接如下:

 

1  设计sgRNA序列

 http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10644

 

2  sgRNA表达载体构建

http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10645

 

3  sgRNA体外合成

 http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10647 

 

4  全基因组sgRNA文库的构建

http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10646 

 

5  sgRNA活性检测

http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10648 

 

6  Surveyor法及测序验证

 http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10649 

 

7  稳定表达Cas9蛋白细胞株筛选  

http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10650 

 

8  利用CRISPR系统进行基因重组donor质粒构建

http://www.bioon.com.cn/server/Show_product.asp?id=10651

 

Biomics相关产品链接:

 

     1  Precut pSG-target Cloning kit & SSA assay

       http://www.bioon.com.cn/reagent/Show_product.asp?id=3077961

 

2  Different type cas9 expression plasmid

       http://www.bioon.com.cn/reagent/Show_product.asp?id=3077958

 

3  sgRNA MICscriptTM KIT/sgRNA synthesis product

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