服务内容包括:
1.1瞬时转染 :
外源DNA/RNA进入受体细胞后,不整合到细胞的染色体上,几天内,大部分外源遗传物质会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释,救活是外源基因的短暂高水平表达(24-96人内检测),是过表达外源蛋白的简便方法,也适于研究启动子等调控元件。
服务项目包括:
l 过表达载体的转染
l shRNA/miRNA载体的转染
l 化学合成的siRNA/miRNA的转染
客户需提供:
l 生长状况良好的宿主细胞株,一并提供细胞特性,培养条件及相关注意事项。
l 我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务,客户需要时我们可以随时邮寄。
l 提供质粒,并说明质粒大小,浓度,抗性,拷贝数等相关背景资料。
1.2稳定转染:
通过各种基因转染技术,靶基因导入哺乳动物细胞后,一般在转染后48h,靶基因即可在胞内表达。根据实验需要,可对靶细胞进行筛选,建立长期稳定表达靶基因的稳定细胞系。根据真核表达载体中所带有的抗性标志,zei常用的标志物有潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin),选用相应的药物筛选,得到稳定表达外源基因的细胞系。
服务流程:
l 筛选浓度测定:以5天左右,细胞大部分死亡,10~14天细胞全部死亡时,zei低抗生素浓度为zei佳筛选浓度。
l 细胞接种:转染前24h接种细胞,确保转染时细胞汇合度在70%左右。
l 细胞转染:用阳性脂质体转染细胞。
l 抗生素筛选:用上述zei佳筛选浓度筛选单克隆,并扩大构建稳定细胞系。
l 鉴定筛选结果:RT-PCR或Western Blot检测。
客户需提供:
l 具有筛选标记的真核表达载体(可为客户构建)。
l 待转染的细胞系及培养条件的说明(生长状态良好,可为客户代购)。