TUNEL实验细胞凋亡检测简介
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。我们采用Promega公司DeadEndTM Fluorometric TUNEL System来进行凋亡检测。其原理是荧光素标记的12-dUTP在末端脱氧核苷转移酶(TdT)的作用下,连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3’-OH末端,利用由荧光显微镜或者流式细胞检测仪检测凋亡的发生。
TUNEL实验细胞凋亡检测项目:
1. 石蜡组织标本的凋亡检测:DAB显色或荧光检测;
2. 细胞的凋亡检测:DAB显色或荧光检测;
3. 结果拍照。
TUNEL实验细胞凋亡检测流程:
组织石蜡包埋;
石蜡标本的切片;
组织切片或细胞的凋亡检测实验;
实验结果图片拍照;
完整的实验报告单提交。
TUNEL实验细胞凋亡检测客户提供:
样品:组织或石蜡组织块;细胞;
凋亡检测试剂盒或无。
TUNEL实验细胞凋亡检测基尔顿生物提供:
凋亡检测结果(实物);实验结果图片;完整的实验报告。
质量保证:
1.客观、公正的实验结果。
2.应提供抗原的相应参数,如分子量、来源、稳定性、存储方法等。
TUNEL检测
TUNEL检测的原理:
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL检测(石蜡切片) | 取下适当的新鲜的组织块固定于4%-10%浓度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛与组织块体积比在10:1和20:1之间,4摄氏度保存运输; |
TUNEL检测(冰冻切片) | 取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中,用干冰运输,固定好的切片应于-80或者-20度保存,并尽快用于检测; |
TUNEL检测(细胞爬片) | 细胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min,换PBS缓冲液4度保存运输,尽快用于检测; |
荧光法需要先拍一张凋亡荧光图,再拍一张原位染核图,再合并图层,终我们提供的为三张荧光图片。
目前,基尔顿生物科技(上海)有限公司,主营实验技术服务、SCI论文服务、动物模型构建、细胞株、elisa试剂盒等,欢迎广大科研爱好者前来咨询选购!