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一、技术流程
方案一: 将野生型和隐性突变体纯合株进行深度测序,通过对SNP、Indel等变异的分析,结合已经发表的常见SNP的数据,从野生型和突变体中找出非同义突变的SNP、InDel,并对这些变异所在的基因进行注释,可以实现快速、有效、经济的鉴定重要突变体的目的。
方案二:对于已经将突变体和野生型杂交构建了F2群体的材料,可以筛选F2代中具有突变表型的植株20株,提取其基因组DNA,按等量进行混合,进行30X的总体测序深度,将测序结果同野生型的结果进行比对,寻找SNP index接近1的位点,并对所在基因进行注释,这几个位点可能是致突变的SNP。该方法可以导致突变位点纯合位点的富集,非常有利于实现突变位点的鉴定。
二、注意事项
该策略适用于已经完成基因组测序的植物,尤其是水稻、拟南芥等,并且野生型zei好是测序的同一品种,否则需要将野生型深度深度测序。