pH 梯度离子交换色谱高分辨率分离单抗唾液酸化异构体

应用领域:细胞生物学

检测样品:蛋白异质性

检测项目:梯度离子交换色谱高分辨率分离单抗唾液酸化异构体

参考标准:Fukuda, M. N.; Sasaki, H.; Lopez, L.; Fukuda, M. Survival of Recombinant Erythropoietin in the Circulation - the Role of Carbohydrates. Blood. 1989 73:84-89.

方案摘要

糖基化蛋白,包括促红细胞生成素、单克隆抗体和各种 激素等,构成了目前已经得到临床使用的生物药物主要 品种。通常附着于多糖分子的末端位置的唾液酸,在许 多生物过程如细胞识别和迁移中发挥重要作用。另外, 唾液酸也对蛋白质药物的特性,尤其对蛋白质药物的循环 半衰期有显著影响。比如,唾液酸化的促红细胞生成素的 循环半衰期是 5.6 小时,而非唾液酸化的促红细胞生成素 是 1.4 小时。1 因此,监测蛋白质的糖基化,包括唾液酸化, 对于糖蛋白的性质研究和生物药物的生产质量控制有重 要意义。 监测糖化蛋白质常用的方法包括完整蛋白质糖型和寡糖 谱分析。常见的寡糖谱分析(包括荧光标记或未标记两 种方法)需要酶解释放蛋白质上的寡糖,所以比较费时 费力。而完整的蛋白糖基化监测不需要酶解,相对方便 简单,而且对分离出来的不同糖型的蛋白质可以进行进 一步的表征分析。现在常用的毛细血管电泳用来分析完 整蛋白糖基化的分辨率稍差,也不易标准化。

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