使用 SYNAPT G2-S HDMS 的电子转移解离(ETD)功能分析重组单抗 的糖肽结构

应用领域:蛋白/抗体/蛋白质组

检测样品:蛋白质

检测项目:糖肽结构

方案摘要

蛋白质糖基化修饰是重组抗体药物生产的一个主要要求,对药效和安 全性有重要影响。典型的糖基化分析方法包括游离多糖分析、糖基化 位点鉴定和糖基化位点的异质性分析。 过去几年里,生物制药实验室已经使用配备光学检测器的液相色谱法 进行多糖表达谱分析。串联质谱方法是分析糖基化位点的一种快速且 灵敏的方法。众所周知,电子转移解离(ETD)是一项功能强大的碎裂 技术,特别适用于不稳定的翻译后修饰(PTM)确证,通常这些修饰难 以通过碰撞诱导电离(CID)技术进行表征。本应用详细介绍了使用ETD 碎裂技术进行重组单抗的糖肽结构分析。 前体离子的价态会影响解离的效率,对ETD技术应用至关重要响1 。当前 体离子的电荷数下降时,通常会观察到非解离的电子转移。因此,在 色谱柱后加入间硝基苯甲醇(m-NBA)来增加ESI离子源产生的离子的带 电状态,从而提高ETD的效果2 。 这里我们展示了基于ETD的质谱技术,用于N-联多糖和O-联多糖分析, 描述其修饰位点和序列信息。本文以常见的重组单克隆抗体曲妥珠为 例进行研究。

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