使用表面带电杂化(CSH)C18色谱柱提高反相肽分离的峰容量

应用领域:蛋白/抗体/蛋白质组,生物制药/仿制药

检测样品:反相肽

检测项目:峰容量

方案摘要

无论是通过自上而下的蛋白质组学对蛋白质进行研究1 还是运用 肽图表征生物药物2 ,肽分离技术都极其重要。这些分析中所遇 到的混合物均具有内在的复杂性。因反相(RP)色谱法具有较高 的分辨率,并且能够轻松地与质谱法(MS)衔接,它已成为首选 的分离方法。 

与梯度反相色谱关系最紧密的性能指标是峰容量,或在梯度时 间内的最大峰数量3 。有趣的是,除使用较小的填料颗粒外,对 固定相进行化学修饰也可以对峰容量产生显著的影响。例如, 表面带电杂化(CSHTM)C18色谱柱的化学特性是对亚乙基桥杂化 (BEH)C18固定相的改进4 ,因为除了C18键合相外,其表面经修饰 后还带有低水平的正电荷5 。业已表明,这种修饰能够改善离子 化小分子的峰形、载量行为和峰容量5-10。 

在本研究中,我们评估了CSH130 C18的肽分离特性,期望能够在 色谱性方面得到相似的改善,因为在常用的酸性条件下,大部 分肽都带有正电荷。针对肽所做的研究表明,与肽分析中先进 的固定相相比,这种新型的固定相能够具有更大的峰容量、独 一无二的选择性,并且对MS信号的依赖性更低。

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