维生素D对食用动物的适当补充具有重要的意义，因为它在骨骼和肌肉发育以及免疫反应调节方面都有很多益处。目前维生素D添加剂有VD3和25-羟基VD3（25-OH-VD3）。传统添加剂VD3需要通过肠道及肝脏吸收，对于肠道疾病、肝功能损伤的禽畜来说，VD3的吸收效率较低。新型添加剂25-OH-VD3是VD3的代谢产物，不再需要经过肝脏的代谢，可直接进入血液循环，吸收效率高，且25-OH-VD3的效价是VD3的3-5倍，最终表达出的生物活性是VD3的20-40倍。由于新型添加剂25-OH-VD3的生物活性高、吸收率高、投喂效果明显、应用面广，越来越受到人们的重视。

本方案采用二维液相色谱测定25-OH-VD3，使用第一根色谱柱对目标物进行初步分离，再将目标物切割进入第二根色谱柱进一步分离，不仅实现了在线净化，还减少了前处理步骤，缩短了前处理时间，提高了分析效率，在30 min内完成25-OH-VD3的净化和定量检测，该方法是分析饲料中25-OH-VD3的快速有效手段。