方案标题： Amgen：基于nanoDSF技术的抗体等效验收标准

检测样品：单抗，双抗及细胞因子

检测项目：抗体等效验收标准

应用领域： 制药

 

方案摘要：

Amgen的研究人员使用各种类型的Biologics对PR进行了评估，并发表在Analytical Biochemistry杂志上。在本文中Amgen的研究人员使用PR建立了等效验收标准。

方案详情:

Amgen的研究人员使用各种类型的Biologics对PR进行了评估，并发表在Analytical Biochemistry杂志上。在本文中Amgen的研究人员使用PR建立了等效验收标准，将其定义为重复性的三倍。对在Site1生产和转移到site2之后生产的抗体进行了对比。蓝色曲线为转移后生产的抗体，红色曲线为转移前生产的抗体（图1）。可以看到不同地点生产的抗体的热变性曲线几乎是相同的，并且相同样品的重复性也非常好。

图1. 转移前后抗体热变性曲线

统计学分析结果显示转移前后的抗体的热稳定性是相同的（表1）。之前我们提到等效验收标准EAC是重复性的三倍，这里使用的EAC是0.6℃，表明Amgen用PR检测到该样品的重复性为0.2℃。

表1. 转移前后抗体统计分析结果

等效验收标准的建立对所用技术的准确性和重复性要求非常高。在本文中Amgen的研究人员使用7种单抗，4种双抗以及2种细胞因子对PR与业内比较认可的金标准DSC进行了对比，结果显示PR检测结果的特异性和准确度完全媲美DSC（图2）。

图2. DSC与nanoDSF单抗，双抗检测结果

PR的重复性以及浓度范围则超越了DSC。不同类型或者不同浓度的抗体重复性均在0.2℃以内（图3）。DSC通常检测浓度为0.2-2mg/ml，Amgen在这项研究中使用的样品浓度跨度为0.05mg/ml-74mg/ml，PR的IgG实际测试结果是5 µg/mL to 250 mg/mL!

图3. 抗体Fab结构域重复检测结果

此外，DSC需要消耗400μl样品，2个小时才能检测完。PR单次运行可检测48个样品，每个样品仅需10μl，70min完成检测，并且最多能同时获得解链温度Tm,聚集起始温度Tturbidity, 实时流体力学半径rH多种参数。可以极大提升检测效率，降低检测成本。