1 从LB平板上挑取新活化的大肠杆菌DH5α单菌落，接种到5mL LB培养基中，37℃振荡培养过夜。 2 取1mL培养物接种到100mL LB培养基（250mL三角瓶）中，37℃振荡培养2~3h。 3 将菌液转移到50mL离心管（2管）中，冰上放置15min。 4 4℃ 4000 rpm 离心5min，弃去上清液，倒置使培养液流尽。 5 用20 mL 冷CaCl2溶液悬浮菌体沉淀合并成一管，在4℃ 4000 rpm 离心5min，弃去上清液。 6 用10 mL 冷CaCl2溶液悬浮菌体沉淀，冰浴30min。 7  4℃ 4000 rpm 离心5min，弃去上清液，用2 mL的冷CaCl2溶液悬浮。 8 分装到数个EP管中，每管200 uL，冷冻保存备用。