GST融合蛋白纯化方法
GST融合蛋白纯化方法 1 目的片段接入pGEX载体;2 涂板,挑单克隆,摇菌至OD600≈0,加入IPTG(终浓度1 mM)诱导6-8 h;3 收菌,每升菌液约以50 mL PBS重悬,加入1%Triton X-100(v/v),1%β-巯基乙醇(v/v),PMSF(终浓度1 mM); 以下步骤均在冰上操作: 4 超声破碎菌体,15000 g,10min离心取上清,在上清中加入适量GST-beads,轻轻晃动令其吸附蛋白1 h;5 2000 g,3min离心弃上清;6 加入至少10倍体积PBS,轻摇至beads悬浮于溶液中,2000 g,3 min离心弃上清;7 重复步骤6 两次;8 加入1 mL GST Elution Buffer,轻摇10 min;9 2000 g,3 min离心,收集上清;10 重复步骤8-9至少两次;11 SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度,Bradford法检测蛋白浓度;12 将蛋白置于-20℃保存