概述
U Cutter酶是一种特异性切割尿嘧啶的酶,它能在含有尿嘧啶DNA碱基处产生单核苷酸缺口。
应用
1.PCR产物克隆。
2.在含尿嘧啶DNA链中产生单核苷酸缺口。
来源
E. coli菌株重组表达。
活性单位定义
在10μl的1×T4 DNA Ligase反应缓冲体系中,37°C反应15min,能使10pmol荧光标记的34bp双链寡核苷酸产生切割所需要的酶量定义为一个单位。
贮存条件
12.5mMTris-HCl(PH7.5), 33mM KCl, 33mM NaCl, 0.3mM EDTA, 160μg/ml BSA, 1mM DTT, 50%Glycerol,-20°C贮存。
ReactionBuffer
在TE缓冲液、PCR反应缓冲液、T4 DNA Ligase反应缓冲液等均有较高活性。
热失活
不能热失活。
质量控制
双链内切脱氧核糖核酸酶检测:50μl反应体系中,1μl酶和1μg pUC57,37℃孵育4h,0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在,表明该产品通过此项测试。
内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测:20μl反应体系中,包含200ng双链的寡核苷酸,1 μl酶,37℃孵育4h,反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解,表明该产品通过此项测试。
DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测:将200ng pUC57酶切片段混合物(pUC57/HindⅢ,pUC57/PstⅠ,pUC57/SmaⅠ),1μl酶,37℃孵育4h,转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时,产品合格。