概述
大肠杆菌核酸内切酶VIII具有N-糖基化酶活性，也有AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链DNA上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶(AP)位点。AP-裂解酶活性则分别在AP位点的3′和5′端切割磷酸二酯键，产生5′磷酸和3′磷酸末端。能被核酸内切酶VIII识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基丙醇二酰脲。
应用
1.单细胞凝胶电泳（彗星试验）。
2.碱洗脱。
3.碱解旋。
来源
克隆有nei基因的重组E. coli菌株。
活性单位定义
1单位指37°C条件下反应1h，能够切割1 pmol含单个脱嘌呤/脱嘧啶位点的34 mer 寡核苷酸二聚体所需要的酶量。
※脱嘌呤/脱嘧啶位点的创建方法如下：37°C条件下， 用1单位UDG处理20 pmol含单尿嘧啶碱基的34 mer寡核苷酸二聚体2min。
贮存条件
12.5mMTris-HCl(PH7.5), 33mM KCl, 33mM NaCl, 0.3mM EDTA, 160µg/ml BSA, 1mM DTT, 50%Glycerol，-20°C贮存。
10×ReactionBuffer
100mMTris-HCl (PH8.0, 25°C), 750mM NaCl，10mMEDTA。
热失活
75°C10min。
质量控制
1.考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90％，无核酸内切酶、外切酶及RNase污染。
2.将200ng pUC57酶切片段混合物（pUC57/HindⅢ，pUC57/PstⅠ，pUC57/SmaⅠ），1μl酶，37℃孵育4h，转化后进行蓝白斑筛选，白斑比例低于3%。
