质粒DNA小量抽提试剂盒

产品简介

本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法，结合 DNA 磁珠选择性吸附 DNA 的方法，达到快速纯化质粒 DNA的目的。适合从 1-4mL 细菌培养物中提取多至 20μg 高纯度的质粒 DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

产品信息

Rnase A： 50 mg/mL ,室温保存。
Buffer S1：细菌悬浮液。加入 Rnase A 后，4℃保存。
Buffer S2：细菌裂解液，室温密闭储存。若出现沉淀，应于 37℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer N3：中和液，室温密闭储存。 Beads: 磁珠溶液，4℃储存。
Elutent：2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5，室温密封储存。

操作流程

使用前准备
        70% 乙醇
        第一次使用前，RNase A 全部加入 Buffer S1 中，4℃储存
        准备无核酸和核酸酶污染的 Tip 头等耗材
        异丙醇
        磁性分离器：可选用海狸磁性分离器，Cat.60201

操作流程

1.第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中，4℃储存。

2.取1-4mL在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富的培养基，菌液体积应减半或更少），12000g离 心1min，弃上清。

3.用100μL已加入RNase A的Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。

4.加入100 μLBuffer S2，温和并充分地上下翻转混合6-8次，12000g离心10min。

5.吸取125μL步骤4中的离心上清于一新的1.5mL离心管中。

6.加入40 μL beads和60 μL的异丙醇，用枪头吹打3-5次。

表1：转移不同上清液量和对应beads和异丙醇体积用量

      a）Beads易沉淀，使用前应摇匀，使Beads充分混匀
      b）根据上清体积调整异丙醇的比例

7.室温放置5min,放置过程中，用枪头吹打混合2-3次。

8.将反应管置于磁力架上静置30s，直至磁珠完全吸附至管壁，上清清澈后，吸弃液体。
a）注意勿将磁珠吸出
b）弃液体后，勿将反应管从磁力架上取出

9.加入200μL70%乙醇，在室温下放置30s，吸弃液体。重复操作1次。
a）注意勿将磁珠吸出
b）注意在磁力架上操作，勿从磁力架上取出反应管
c）请务必吸尽反应管内残留的液体

10.让磁珠在室温下干燥3-5min.
a）注意在磁力架上操作，勿从磁力架上取出反应管
b）在室温下翻转取出残留的乙醇
c）勿使磁珠过分干燥，否则将影响DNA得率

11.移去磁力架，加入60-100μL Eluent或去离子水，用移液器吸头轻轻吹打管壁磁珠，直至分布均匀，静置2min。

12.将反应管置于磁力架上，静置直至磁珠全部吸附至管壁，吸取上清至一新的离心管中，即得高纯度的DNA。

• MN-P96 质粒小量抽提说明书20191115

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