色谱分离最常见问题是峰形、分离状况、洗脱时间或性能改变。可以分两个步骤来处理不可接受的色谱分离。首先，从色谱方面来评价存在的问题，其次，对产生问题的原因进行独立分析。
评价色谱分离时最好使用标准品而不是样品。每次进样时应该做好样品的特性和色谱性能记录，这样需要作比较时能够提供历史数据。
下面小编为大家带来导致色谱分离改变的最常见原因及应采取的解决方法：
1.系统不平衡
使色谱柱和检测器有足够的平衡时间。如果进行梯度分析，两次分析之间，平衡时间要充足。
第一次使用离子对试剂，要保证用充足的时间和充足的流动相冲洗色谱柱，以达到充分平衡。
2.梯度分析时未经充分平衡
在两次梯度分析间应有足够的平衡时间。进样要保证是初始时间的流动相组分流经色谱柱。未经充分平衡时会导致错误的保留时间。
3.泵压力/运行故障
参考流量曲线图，找出原因并纠正。
4.室温变化
保证仪器周围温度稳定并达到平衡。如果无法达到温度稳定，或者不能达到平衡，建议使用色谱柱温箱，柱温箱系统应完全将色谱柱封闭。确保预先混合的溶剂能互溶，且流动相已经混合均匀。
5.进样体积太大、浓度太高
减小进样体积或稀释原始样品（注：使用弱溶剂，进样体积可增至约为柱体积的10%，使用强溶剂进样体积能达到柱体积的1%）。
6.色谱柱被污染
用一根性能已知的色谱柱换下被污染的色谱柱，并进行一系列标准样品分析，比较保留时间，如果保留时间重复，表明原色谱柱已被污染。清洗色谱柱或更换新色谱柱。
快速指南：1.引起保留时间变化的最常见原因是系统不平衡，开始分析前，系统必须平衡好。2.分析过程中温度改变是保留时间变化的另一主要原因。3. 建议在等度分离中尽量预先混合好流动相。
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