国家卫生健康委员会3月12日发布了《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760-2024）等47项食品安全国家标准和6项修改单的公告（2024年 第1号）,其中包含了GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定。新的标准于2024年2月8日发布，将于2024年8月8日开始实施。

      什么是乳铁蛋白？

乳铁蛋白是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白，乳铁蛋白存在于人体的乳汁和各种分泌液中，在母乳中含量最高，初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能与病原微生物竞争铁源，抵御病原微生物侵袭，从而保护婴幼儿免疫损伤。

肝素亲和柱简介

参考《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》，肝素亲和柱能够特异性的纯化样品中的乳铁蛋白，样品前处理后，通过亲和柱净化，乳铁蛋白特异性吸附在亲和柱上，用淋洗液将亲和柱上的杂质除去，用洗脱液通过分离柱，将乳铁蛋白从亲和柱上分离下来，最后，将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。

肝素亲和柱规格：

柱容量：2mg，

包装：10支，25支/盒，

保存：2-8℃

保质期：18个月

使用对象

本方法适用于巴氏杀菌乳，调制乳，含乳饮料，调制乳粉，乳基婴幼儿配方食品等。

实验溶液制备

洗脱液（磷酸盐缓冲液Ⅰ）：将肝素洗脱液固体试剂包（货号：C3012）用250mL纯水溶解，混匀，配制于洁净密封的试剂瓶中，保质期6个月。

磷酸盐缓冲液Ⅱ：将肝素磷酸盐缓冲液Ⅱ固体试剂包（货号：C3010）用1000mL纯水溶解，混匀，配制于洁净密封的试剂瓶中，保质期1个月。

样品前处理：

1、液体奶样品：(巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料）

称取 5g (精确至0.01g )试样于烧杯中,加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ 提取，分次将样品转移至 25mL容量瓶,用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度，充分混匀后转入离心管，在 4 ℃ 条件下 10000r / min 离心8min ,取样液待净化。

2、固体样品：（婴幼儿配方奶粉、乳粉等）

称取 1g~5g (精确至 0.01g )试样于烧杯中，加入温热(温度不超过 50℃ )的磷酸盐缓冲液Ⅱ，搅拌使样品溶解，冷却至室温，分次将样品转移至 50mL 容量瓶并用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度，充分混匀后转入离心管中，取 40.0mL 溶液在 4℃条件下 10000r / min 离心 8min，取样液待净化。

亲和柱净化程序：

肝素亲和柱（货号：IAC323）使用前先加入5.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ 活化。准确移取  10. 0mL 上述样液过柱，控制流速在1mL / min~3mL / min，待样液滴完后，用 10.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ 淋洗，弃去流出液，再用5.0mL磷酸盐缓冲液Ⅰ 洗脱，收集洗脱液并用磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至5.0mL，过0.45μm水相针头滤器，供上机检测分析用。

液相色谱条件：

色谱柱：Cloversil XB-C4, 5μm, 300Å, 4.6×250mm

流速：1.0 mL/min

检测器：紫外检测器，280nm

进样体积：50uL

流动相：0.1%三氟乙酸与乙腈梯度洗脱，见下表

柱温：30℃

表1 梯度洗脱表

时间  /min

乙腈  /  %

0.1%三氟乙酸  /  %

01585208515221585251585

实验图谱及数据：

高效液相色谱仪检测乳铁蛋白标准品（400ppm)谱图如下：

添加回收实验数据如下：