如何修炼成流式高手 -方案设计(上)

2022-1-31 11:37

1643600256518294.png

我们时常会遇到,明明染色Marker都来自一篇文献,但是最后实验结果却变成“买家秀与卖家秀”。 

1643600256451155.png

产生这种现象的原因是什么?以及我们为什么要如何优化我们的染色方案呢?我们先看具体的例子。

1643600257622569.png

方案1与方案2,所选择的marker都完全一致,所选用的荧光素种类一样,但是搭配不一样。那么我们看看同一个样本,最后各个细胞亚群的结果一样吗?

1643600258689100.png

方案1与方案2,CD4+CD25+ 的百分比接近(A与C比较),可是CD8+CD69+的百分比却相差很多(C与D比较)。

造成这种原因其实就是我们平时说到到spreading现象。

1643600259722362.png

Nguyen, Richard, et al. "Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design." Cytometry Part A 83.3 (2013): 306-315.

如果要优化流式染色方案中,由spreading现象产生的分辨率降低,我们可以使用SWOFF方法。通过如下流程,就可以很快找出究竟是由于那个通道的配色不合理,导致分辨能力下降。

1643600260664870.png

1643600260261959.png

在不同的检测平台,元件的光电转化效率会直接影响仪器总体分辨率。

1643600261111116.png

不仅如此,科技的进步带来的还有更小的spreading现象,这使得配色也更加的轻松,结果也更加的准确。

1643600262735464.png

你想知道如何检查自己的染色方案么?利用SWOFF的方法,可以帮您发现并且优化,使检测更加准确。点击下方阅读全文,获取SWOFF的详细步骤。 

1643600262613904.png


领域:细胞生物学

相关产品