随着现代食品工业的发展，人们为了增加食品的风味、改善色泽和延长货架期等，采用了多种现代食品加工技术，但是不幸的是，由于种种原因，在某些食品加工过程中使用了危害人们健康的物质，比如最近出现的食品中添加“塑化剂”邻苯二甲酸酯类物质。

以往，由于人们对邻苯二甲酸酯类的安全性认识不足，多种食品都涉嫌“被添加”。博纳艾杰尔科技根据不同食品基质的具体情况，开发了一系列的检测方案，以供大家参考。

 

1.水性样品

此类样品包括瓶装纯净水、矿泉水，茶、果汁和功能饮料等；某些可水溶解的固体样品。可以先制成水溶液，然后全部作为待处理液，如无脂糖果。推荐前处理柱为Cleanert DEHP （500mg/6mL）。

        样品处理：取10mL样品，进行固相萃取富集处理

         固相萃取方法：

        活化：5mL甲醇、5mL水

        上样：10mL水性样品         淋洗：5mL5%甲醇水，真空抽干20min。

        洗脱：5mL甲醇

        检测：将洗脱液用氮气吹干后，以1mL甲醇定容，然后用液相色谱法检测。

    说明：此法多适用于配套液相色谱检测，当样品中邻苯二甲酸酯类的含量较低时，需要采用固相萃取富集才能检测的情况。

    一般来说，对于此类样品，可以采用正己烷液液萃取的办法，用GC/MS（灵敏度较高）直接检测。

 

     2.低脂液体样品

     此类样品包含液态奶制品、果酱、糖浆等。推荐前处理产品为Cleanert MAS-PAE管。

     样品处理：向玻璃离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

    检测：GC/MS检测。

 

     3.低脂固体食品

    此类样品包括奶粉、饼干、糕点、果冻、奶糖等，推荐产品为Cleanert MAS-PAE管。

    样品处理：取1g已制成粉末状的样品，2mL水，加入到Cleanert MAS-PAE离心管中，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

    检测：GC/MS检测。

 

    4.高脂样品

此类样品包括植物油脂、动物油脂、奶酪、动物组织性食品等，推荐前处理柱为Cleanert PAE。

4.1 动植物油脂样品的处理

取0.2g样品，用1mL正己烷溶解，作为待净化液。 固相萃取方法： 活化：5mL正己烷 上样：全部待净化液 淋洗：7mL正己烷 洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。 40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡 3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL玻璃样品瓶中，作为待 检液。

检测：GC/MS检测。

4.2其他样品的处理

  取样品0.5g，以5mL正己烷于密封玻璃瓶中超声提取，然后以4000rpm转速，离心5min，取上清液作为待净化液。若样品中含有水，视情况加入适量无水硫酸钠后，再进行上述操作。

固相萃取方法： 活化：5mL正己烷 上样：全部待净化液 淋洗：3mL正己烷 洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。 40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡 3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL样品瓶中，作为待检液。

检测：GC/MS检测。

 

5.复杂样品

此类样品多为油水混合态，同时添加有多种风味物质，成分比较复杂，包括方便面调味包，酱油、醋、用来调味的其它酱汁等。根据样品中的脂肪含量，对于高脂样品推荐前处理柱为Cleanert PAE-C柱，对于低脂样品推荐使用Cleanert MAS-PAEc管。

5.1 以Cleanert PAE-C柱进行样品处理，以方便面调味包为例：

取0.5g样品，加入5mL正己烷，涡旋振荡3min后，再加入500mg无水硫酸钠，涡旋振荡3min后，以4000rpm转速，离心5min，取全部上清液作为待净化液。 固相萃取方法： 活化：5mL正己烷 上样：全部待净化液 淋洗：3mL正己烷 洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷：甲苯（50:40:10，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。 40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡 3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL样品瓶中，作为待检液。

检测：GC/MS检测。

5.2 以Cleanert MAS-PAEc管进行样品前处理，以酱油为例

样品处理：向Cleanert MAS-PAE离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲苯（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAEc填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

检测：GC/MS检测。

 

方法更新： 1.  含油脂食品中邻苯二甲酸酯类化合物的检测的样品前处理

                               2.   SPE-GC/MS法检测纯油脂中邻苯二甲酸酯类化合物 

 

附件一：

高效液相色谱法检测16种邻苯二甲酸酯的含量

 

色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L）

流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

 

 

Time/min	A/%	B/%
0	60	40
2	50	50
10	40	60
12	30	70
20	30	70
31	0	100
40	0	100
40.01	60	40

         流  速：1.0 mL/min 波  长：242 nm 进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 样  品：16种邻苯二甲酸酯 浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） 溶  剂：正己烷 /40%流动相A

柱  温：30℃ 

 

图1 16种邻苯二甲酸酯标准品HPLC色谱图（样品浓度：25ppm）

（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸二苯酯，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP）

表1 16种邻苯二甲酸酯标准曲线表

峰位置	标准曲线方程	R2
1	Y=24.99X+5.202	0.999
2	Y=17.84X+3.424	0.999
3	Y=24.21X+3.974	0.999
4	Y=14.03X+3.658	0.998
5	Y=24.21X+3.974	0.999
6	Y=17.51X+4.972	0.997
7	Y=17.22X+4.098	0.999
8	Y=18.67X-0.302	0.997
9	Y=12.66X-1.877	0.998
10	Y=14.38X+0.445	0.997
11	Y=15.35X+0.798	0.998
12	Y=11.46X+3.475	0.998
13	Y=13.52X+2.67	0.998
14	Y=9.915X+26.59	0.996
15	Y=10.61X-0.041	0.999
16	Y=9.404X+11.14	0.999

结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离16种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测16种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有16种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。

 

附件二 气质联用法检测15种邻苯二甲酸酯   仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 色谱条件： 色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 进样口：250℃，不分流进样 程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 进样量：1μL 流速：1 mL/min   质谱条件： 接口温度：280℃ 电离方式：EI 电离能量：70eV 溶剂延迟：7min 监测方式：SIM模式，监测离子见下表

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	SIM离子
1	8.265	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163、77
2	9.135	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149、177
3	10.888	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149、223
4	11.637	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149、223
5	11.979	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP