细胞培养基的配制的小窍门（四）

四、 实验步骤

(一) 准备和安装滤器

在超净工作台内打开包有清洗灭菌好的过滤器的牛皮纸，并架好。胶管一段接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管伸入到已消毒的瓶子中。用滤泵做正压过滤，压力数字为2。过滤后检查滤膜是否完好无损。

(二) 合成培养基的配制

1、 取3000ml三蒸水，加入合成培养基干粉，用磁力搅拌一定时间(2-4h)使之充分溶解。

2、 通入适量CO2 或加入6mol/L盐酸调pH至6.0左右。

3、 加入一定量的NaHCO3调节pH至7.0左右。

4、 加水至最终体积。

5、 在超净工作台中对溶液进行过滤除菌，分装入250ml或500ml培养瓶中，用翻冒塞塞紧瓶口。

6、 4℃冰箱储存(可以-20℃储存)。

(三) 小牛血清的处理

市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还要做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体。

1、 将血清加热到56℃并保存30min，期间要不时的轻轻摇晃，使受热均匀，防止沉淀析出;

2、 处理后的血清储存于4℃;

3、 小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。

(四) 生长培养基的配制

除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需要加入一定量的小牛血清和抗生素。

1、培养基分装成小瓶(100ml-200ml)以便使用，翻冒塞塞紧瓶盖;

2、按以下比例配制：

基本培养基占80%-90%，小牛血清占10%-20%。

按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使用青霉素和链霉素的终浓度分别是100U/ml和100μg/ml。