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温度对荧光强度的影响比较敏感，因此荧光分析时一定要控制好温度。温度上升使荧光强度下降，其中一个主要原因是分子的内部能量转化作用。当激发分子接受额外热能时，有可能使激发能转化为基态的振动能，随后迅速振动驰豫而丧失振动能量。另外一个原因是溶液温度下降时，介质粘度增大，荧光物质与溶剂分子的碰撞也随之减少。相反，随着温度上升，碰撞频率增加，使外转换的去活化几率增加。 由于荧光物质在低温下荧光强度比在室温下有显著增强，为了提高灵敏度，近年来低温荧光分析已发展成为荧光分析中的一个重要分支。
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