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颗粒污泥扫描电镜观察的样品预处理方法

2018.6.27
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JMCA

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 0.2M 磷酸缓冲液的配制: 磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H2O) 2.94克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29克 纯水 500mL pH调至7.4 2.5%戊二醛固定液的配制: 25% 戊二醛 10mL 双蒸馏水 40mL 0.2mol/L磷酸缓冲液 50mL 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4

颗粒污泥扫描电镜观察的样品预处理方法如下: (1)取样与清洗:在所需要的不同的反应阶段,从反应器中取出数颗好氧 颗粒污泥,放入5mL 的离心管中,用去离子水清洗数次,弃去上清液。 (2)固定:把清洗好的颗粒污泥加入2.5%,pH 为6.8 的戊二醛溶液并淹没 样品,并置于4℃冰箱中固定2-12 小时。 (3)冲洗:固定好的好氧颗粒污泥,用0.1mol/L,pH 值为6.8 的磷酸缓冲 溶液冲洗3 次,每次10min。 (4)脱水:采用梯度乙醇脱水,将冲洗好的样品依次置于系列浓度50%、 70%、80%、90%的乙醇进行脱水,每次10-15min,再用100%的乙醇脱水3 次, 每次10-15min。 (5)置换:用乙醇:乙酸异戊酯为1:1 的溶液,纯乙酸异戊酯各置换一次, 每次15min。 (6)干燥:将置换后的样品小心取出,放入滤纸叠成的小盒中,置入干燥 器中干燥8 小时。

(7)粘样与喷金:将干燥好的颗粒污泥样品,用镊子小心取出干燥好的样 品,用导电胶把颗粒样品粘附在铝制托盘上,之后用离子溅射镀膜仪(IB-5(Giko) 型)在样品表面镀上一层1500nm 厚度的金属膜。

(8)观测:将处理好的待测样品置于扫描电镜(HITACHI S-4700 型)下观 察。


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