摘要：培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节，培养基自身质量的优劣、保存条件、环境是否得当、配置使用的正确与否直接影响到培养基的质量从而影响到检测结果的准确性、可靠性，可见培养基是检测工作的基础自80年代以来，微生物培养基专业在研究开发、制造和应用等领域发展迅速，尤其是干燥培养基以其便利、实用和高效，得到使用者的认可。但国内该行业生产工艺的设备较落后，对产品的分析手段也不完善，成品培养基质量参差不齐，影响了使用效果，因此本文对目前微生物检测中培养基的购置、制备、贮存和使用过程中的关键点，从培养基的配置、水化、灭菌、接种、性能测试等方面应采取的措施进行探讨，以提高和完善实验室中培养基的质控水平。
随着生物技术的迅速发展，微生物对医药卫生、临床检验、实验动物及食品、化妆品、工农业、环保等众多领域发挥着越来越重要的作用。由于各类微生物有着不同的营养要求以及对微生物培养的各自工作目的，促进了微生物培养基的研究、生产、使用技术的不断改进。虽然国家标准GB/T4789.1-4889.31-2003中对检验中所用的培养基、配置方法作了具体规定，但在实际的实验室检测工作中还存在着许多复杂因素，忽视这些因素很可能给检测结果带来偏差，甚至错误，从而无法正确评价被测样品的微生物污染状况。本文结合在微生物检测中针对培养基的配置及使用过程中的实践经验、操作方法、质量控制等措施谈一些观点和看法，希望有利于微生物检侧工作更好地开展[1]。
1培养基的分类
1.1固体培养基 固体培养基是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等，常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面，实验室中常用的有营养琼脂、麦康凯、TCBS等。
1.2液体培养基 液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，实验室中常用的有生理盐水、肉汤培养基、致病菌的各类增菌液。
1.3半固体培养基 半固体培养基是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价，实验室中常用的有保存菌种的半固体。
2培养基的购置与验收
购置：从培养基自身的质量来看，不同生产厂家的产品，甚至同一产家不同批号的产品都会存在差异[2]。依据ISO/IEC17025：2005《检测和校准实验室能力的通用要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商，这是培养基购买过程中重要的步骤。应选择产品市场信誉度高、有质量保证和服务保证能力的企业；企业是否通过了质量管理体系是较为客观的评价指标。但要求生产企业提供：培养成分名称及产品编号、批号、使用前的PH值、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书和必要的安全/危害数据等材料[3]。
3培养基的贮存
干粉培养基应保存在阴凉干燥处，避免阳光直射；末开瓶的培养基在室温下保存3年，开瓶后的干粉培养基易吸潮，应注意防潮并在6个月内用完。定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感观检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能在使用，液体培养基和平板类的培养基储存于2℃～8℃的冰箱内。
4培养基的制备
目前实验室内培养基的配置主要分为干粉培养基和新鲜培养基二类。干粉培养基是将培养基原材料浓缩，喷雾干燥，然后根据要求将干粉原料按一定配比制成各种不同的培养基。干粉培养基在使用时，只需按说明书称重，加入蒸馏水、分装、高压灭菌后即可使用[4]。
实验室自做的培养基必须准确根据处方，做好培养基的配置记录，对配方中各成分应该分别添加，注意添加顺序，分装灭菌之前各成分应互溶或完全均匀。
4.1培养基制备用水 应使用电阻率不小于30万Ω的蒸馏水或与其同质的水，不使用去离子水和自来水，因为去离子水即使经过滤除菌还是可能含有抑制一些微生物生长的物质，自来水中含有有效氯等抗菌物质，培养基加水时应沿着容器壁缓慢加入，可先加入1/3水量，振摇后再加入剩余的2/3水量，并顺势将附着于容器壁的培养基粉末冲下。其次实验室内的蒸馏水不可保存时间过长，最好3个月内进行更换，以保证蒸馏水内无微生物的污染。
4.2培养基的称量和用量的计算
4.2.1培养基的称量 称量时要用专用的角匙，若称量多种培养基，每次使用后角匙要清洗，晾干后再进行称量，避免交叉污染而影响检测结果。称量粉末类培养时尽量戴上口罩，防止粉末的吸入，做好检验人员的个人防护工作。选择性的培养基极易吸潮，吸潮后培养基的pH将降低，改变了培养基的性质，所以应选择湿度较低的房间作为培养室或干粉类的培养基选择专用房间称量。
4.2.2培养基用量的计算 按照培养基的用法说明由配方的规定和需要制备的培养基数量精确计量取用，不同批号、不同厂家同一种的培养基用量和配置存在着不同，每一次使用，都要核对用法，重新计算用量。
4.3培养基的复水 复水所用的玻璃容器最好为中性硬质的材料，耐高温高压，不锈钢器具为316L材质经焊缝射线检测，不使用铜锅和铁锅，防止金属离子的析出。计量的器具每年要进行校正，合格后才可使用。新使用的玻璃容器要使用0.2%的过氧乙酸浸泡24h，冲洗干净后才可使用，这样可防止容器中存有的游离碱性物质，使培养基中的pH值升高[5]。容器大小的选择：应根据配置的需要大于复水后培养基总体积的二倍以上，防止在加热溶解时培养基溢出。
5培养基的分装
根据需要将培养基分装于不同的三角烧瓶、试管等
5.1基础培养基 实验室应常贮有无菌的基础培养基，以便临时分装或配制鉴别培养基等。分装的量根据使用目的和要求决定，但必须定量分装，便于应用。一般分装于三角烧瓶或盐水瓶内，高压灭菌后备用。
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