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透射电镜生物样品制备步骤

2018.6.30
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JMCA

致力于为分析测试行业奉献终身

生物样品, 透射电镜, 制备步骤

一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三.脱水:
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮 室温 15-20分三次
四.包埋:
纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五.固化:
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 24小时
六.超薄切片机切片 50-60 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜观察。拍片

由于生物样品含水太多,在电镜中会被真空蒸发掉从而破坏了结构,所以需要一些能够把水温和取代掉、并且自身没有结构的物质,这就是树脂包埋剂。正因为生物脆弱、结构容易破坏,所以才需要温和的制样方法,方法才这么复杂。生物电镜制样就是最主要的工作,看电镜倒是次要的。

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