点样：将试样溶液用毛细管在层析板上距离板底部约1.5厘米的位置点若干下（次数根据样品浓度而定），并静置顷刻（或加热）以使溶剂完全蒸发。若溶剂难以挥发，则点样之后需要将板放于真空容器中干燥后再使用。溶剂的蒸发是必须的，否则残留的溶剂会与流动相作用，降低流动相的均一性，导致分离效果变差。
将少量合适的溶剂（流动相）倒于一个合适的玻璃器皿（展缸）中，让流动相高度不超过1厘米，并在上面放上表面皿使溶剂蒸气在展缸中饱和。可在展缸底部放上一张滤纸，让滤纸底部浸没于溶剂中并靠在展缸内壁，过几分钟后让洗脱溶剂蒸发并在展缸空间内饱和。若不经过以上步骤可能会导致分离度的下降或使结果不具重复性。
然后将层析板置于展缸内（样品点不可触碰溶剂表面），盖上盖子让溶剂通过毛细现象缓慢爬升。溶剂遇到样品混合点时，会带着样品上升（即洗脱样品）。当溶剂快到层析板顶端时，将板拿出，迅速记录溶剂到达的高度并晾干。不要让溶剂爬升到达板的顶部。
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