样品制备中相关实验方法
用于免疫荧光抗体标记组织切片的载玻片需经过明胶、蛋白胶、多聚赖氨酸 ( Poly-L-Lysine)、硅烷(3-氨丙基三乙氧基硅烷,APES) 等处理,以粘贴组织切片,防止组织切片在免疫反应过程中脱落。简易明胶处理方法是将干净的载玻片浸于 0.1% 明胶热溶液中一分钟,取出沥干,65 ℃ 烘烤 1h,放至室温即可使用。0. 5% 明胶 - 硫酸铬钾处理方法是溶解4g 明胶和4g 硫酸铬钾于 800 mL d2H2O 中,65℃加热30 min 左右,使其溶解(不要使溶液沸腾)后,过滤溶液,并将溶液在室温下放置至 50 ℃ 左右,将玻片在溶液中浸提 3~4 次,在室温下过夜使其蒸发干,为防止灰尘,用保鲜膜覆盖,130 ℃ 烤干 3 h 以上,干燥保存备用。处理液使用后,可加入 0. 05% NaN3 ,4 ℃ 保存,下次处理载玻片时将溶液加热至50 ℃ 即可。大量处理过的载玻片,可以收集于载玻片盒中,放在干燥箱中长期保存。蛋白胶处理方法简便易行,多用于样品量不多的情况,取新鲜鸡蛋清充分搅拌,4 ℃ 过滤,清液加入等体积无荧光甘油,再加入 0. 05% NaN3 充分混合,分装成每管 1 mL,- 20℃ 保存,使用时室温融化,取少量蛋白胶均匀涂抹在干净的载玻片上,40℃烘干,放至室温即可使用。目前国内可以采购到明胶、多聚赖氨酸、硅烷等处理过的载玻片,大大节省了样品制备的准备时间。