摘 要：不同溶剂系统和NaHCO3 前处理茶色素复合物对高速逆流色谱(HSCCC)分离茶黄素分离效果比较，以及对仪器参数的优化，探索应用H S C C C 分离茶黄素单体。试验结果表明：采用溶剂系统乙酸乙酯、正己烷、甲醇和水(3:1:1:6，V/V)具有较佳的分离效果；NaHCO3 前处理明显有助于茶黄素单体的分离；当进样量为200mg、流动相速度1.2ml/min、仪器转速880r/min 时，能达到最好的分离效果。
关键词：茶黄素单体；分离；高速逆流色谱

    茶黄素最早是由Roberts E.A.H.发现的[1]，是多酚物质氧化形成的一类能溶于乙酸乙酯的具有苯骈卓酚酮结构的混合物。现已发现的茶黄素有12 种组分[ 2 ]，其中茶黄素(TF)，茶黄素－ 3 －没食子酸酯(TF － 3 － G)，茶黄素－ 3，3’－双没食子酸酯(TFDG)和茶黄素－ 3’－没食子酸酯(TF-3'-G)是4种最主要的茶黄素[3]。茶黄素是红茶的重要品质成分，具有良好的医疗保健功能。近年来的研究表明，茶黄素具有抑菌、抗病毒、防衰老、增强免疫机能、预防龋齿、防癌抗癌、抗氧化、预防心脑血管疾病等功效；甚至对艾滋病毒逆转录酶和多种DNA 聚合酶也有特异抑制作用[4,5]。但由于目前茶黄素单体的分离成本较高，单体分离的工业化程度尚低，故对茶黄素生理活性的研究也尚不充分。目前应用较多的分离方法是基于分子筛原理提出的Sephadex LH-20 柱层析, 但分离时间过长，达30 多个小时左右；上样量少，一次仅上样几十毫克，成本高昂。
    高速逆流色谱(High-speed CountercurrentChromatography，简称HSCCC)是由美国国立卫生院Ito博士研制开发的新型色谱技术，可以在短时间内实现高效分离和制备，并且可以达到几千个理论塔板数的分离效果，经过近十几年的发展完善，这项新型的色谱技术正日趋成熟。HSCCC 不使用固相载体作为固定相，而是使用液相载体做固定相，利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相) ，随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的大小次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。它克服了使用固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形拖尾等缺点[ 6 ] ，特别适用于分离诸如天然产物、抗生素、蛋白质和肽、无机物等[ 7 ]极性大的组分和一些生物大分子；同时保持了对活性无
伤害的分离。
    高速逆流色谱属于精密的分析仪器，检测物质的灵敏性较高，如果进入高速逆流色谱的粗品含有较多的杂质，将必然影响目标提取物的分离制备。所以用高速逆流色谱分离茶黄素，应先制得具有一定纯度的茶黄素粗品，然后再进行HSCCC 方法将茶黄素单体分离，这样就可能达到更高效的分离的目的。在本次的研究中，将应用分析性HSCCC 分离提纯具有一定纯度的茶黄素粗品，并用HPLC 对分离结果进行检测鉴定。通过观察有无NaHCO3 前处理对分离结果的影响、试验不同的溶剂系统所产生的分离效果来确定具有最佳分离效果的溶剂系统比例；同时，通过比较运行H S C C C 时不同的仪器参数所得到的结果来确定具有最佳分离效果的仪器参数。