饲料中粗蛋白测定的实验方法

饲料分析是饲料生产中其原料和品质鉴定的重要依据，也是评价饲料质量好坏的标准。就比如饲料中粗蛋白含量将直接决定饲料的营养价值，因此，饲料分析过程少不了粗蛋白的检测，不仅如此，还需要掌握饲料粗蛋白测定的实验方法，用到的实验设备是粗蛋白测定仪，样品制备及操作方法如下：

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200克，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，以高氯酸-硫酸消化法为A组，用25毫升锥形瓶称量3组平行样品。同时设置2组空白组，以蔗糖作为空白。准确称量样品0.5克，精确到0.1毫克。具体质量为，A1组0.5008克，A2组0.5002克，A3组0.5006克，空白A1组0.5001克，空白A2组0.5003克。以混合催化剂法为B组，用50毫升凯氏瓶称量3组平行样品。同时设置2组空白，以蔗糖作为空白。准确称量样品0.5克，精确到0.1毫克。具体质量为，B1组0.5007，B2组0.5005克，B3组0.5002克，空白B1组0.5007克，空白B2组0.5004克。向A组样品中分别滴加5滴蒸馏水润湿，再添加6毫升浓度为98%的浓硫酸，加入6滴60%高氯酸，以电阻丝消煮2分钟，冷却后再加入4滴60%高氯酸，反复消煮5次，后3次高氯酸加入量依次为3滴、2滴、1滴。溶液颜色逐渐变浅，直至无色透明。定容至100毫升。向B组样品中分别加入混合指示剂6.4克（0.4克五水硫酸铜，6克硫酸钾），与试样混合均匀，再加入12毫升浓度为98%的浓硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360~410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2小时。冷却后定容至100毫升。

将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10毫升注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10毫升浓度为40%的氢氧化钠水溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4分钟降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。对两组样品及空白分别重复此操作。

蒸馏步骤的检验。精确称取0.2克硫酸铵，代替试样，按蒸馏步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。蒸馏后的吸收液立即用0.01摩尔/升盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。最后通过公式（蛋白质（%）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V′/V）×100）计算即可。