死体积对柱效的影响

我们可以设想这样一个场景，在一条湍急的河流中倒入一瓶墨水，墨水首先会是一个小小的点，渐渐顺水流而行一点点扩散，而到下游的时候肯定已不再是一个点，而是一个宽宽的谱带了。这个现象完全适用于HPLC的分析，试想样品由进样器起步为一个小小的点，流经输液管路和色谱柱，当到达检测池时必然也像墨水一样不可避免的有扩散，如果扩散小那么色谱图中峰宽就小，扩散大峰宽也大。为了得到较小的理想峰宽，我们就不得不讨论到一个常见的专业术语——死体积。

液相中的死体积，是指不被固定相滞留的组分，从进样到其出现zui大峰值时，所消耗流动相的体积。死体积包括三个部分：进样器至色谱柱管路及色谱柱出口管路的体积；色谱柱内固定相颗粒间的间隙（被流动相所占据，V_m）；的体积；检测器流动池的体积。本文中重点讨论系统管路对色谱峰宽的影响。

就像小河一样，如果河流窄的话，墨水肯定扩散就小，同样，液相系统管路细，扩散就小。那么管路的粗细到底对谱图的结果有多大的影响，笔者在长期检验色谱柱柱效的工作中有过这样的经历：把进样器到色谱柱这一段管路，内径由0.25mm更换成0.5mm，笔者发现本来柱效合格的色谱柱变的远远低于合格标准，即由80000N/m的柱效下降到了50000N/m，如下图，峰展宽明显。

而0.5mm在液相色谱系统中极其常见，一般多用于高压泵出口到进样器这一段，可以降低系统压力。而进样器之后则尽可能选择较细的管路。

因此，为避免柱效降低及峰展宽的发生，应尽量减少连接管路的长度，缩小连接管路的直径，减少系统中的死体积。