实验方法原理 | 利用一系列不同浓度的DNA标准溶液(0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml),或已知浓度的DNA marker,和未知浓度DNA样品一起进行琼脂糖凝胶电泳,以EB染色后,在凝胶图象分析仪上观察,比较标准浓度及未知浓度的亮度,来求取DNA 的含量;比较DNA样品与DNA marker条带位置,推知DNA 样品分子量。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5xTBE电泳缓冲液三角瓶中,摇匀,在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭(EB)至终浓度0.5 ug/ml,并摇匀。
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注意事项 | 1. A260/A280>1.8表示DNA/RNA的纯度高。若数值<<1.8,表示纯度低,这时由OD260测得的DNA含量较不可信,核酸溶液中含有较多蛋白质,因此最好将前述所得核酸再重新抽取。
2. 测定260 nm 吸光值,OD=1.0代表值如下:
(1)ds DNA (double stranded DNA) = 50 mg/ml
(2)ss DNA (single stranded DNA or simgle-stranded RNA) = 40 mg/ml
(3)oligonucleotide = 33 mg/ml
3. EB是致癌物质,切勿用手接触,更不要污染环境。 |