在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 切下组织并立即剪成小块,置于液氮中冻结。
2. 将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。 3. 500 g 离心细胞5 min,弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。
6. 将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。
7. 用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品,1 700 g 离心10 min。
10. 加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉,1 700 g 离心2 min。
11. 用70%乙酵洗涤,晾干,沉淀用TE。 |
注意事项 | 1. 如果是用肝组织,要除去胆囊,因其含有高水平的各种消化酶。 |