质粒DNA大量制备实验——平衡离心法
| 实验方法原理 | 这种方法可以得到除去了大多数杂质的高纯度质粒DNA。但它需要使用溴化乙锭，并且需要长时间的超速离心来形成密度梯度。
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 粗裂解物制备方案最后一步得到的沉淀溶于4 ml TE缓冲液中，加入4.4 g CsCl，溶解后，再加入0.4 ml 10 mg/ml 溴化乙锭。
2. 将溶液转入一个5 ml 的quick-seal快速封口的超离心管中。
5. 首先从管的顶端描入一支针头，然后用带另一 20G针头的3 ml 注射器将质粒带吸出。
6. 进行第二次超速离心，除去混杂的RNA和染色体DNA以获得更高纯度的质粒。
7. 按质粒溶液的1.5~2倍体积装Dowex AG50W-X8柱子，用数倍体积的TE/0.2 ml NaCl溶液清洙和平衡柱子。
9. 立即收集流出液，然后用2倍于上样体积的TE/0.2 ml NaCl溶液洗脱柱子两次。
10. 加入2倍体积乙醇于室温或-20℃沉淀质粒DNA，于4℃，以10 000 g 离心 10 min。
11. 沉淀用70%乙醉洗涤1遍，真空干燥，溶解于TE缓冲液，并于4 ℃保存。 收起 |
| 注意事项 | 一、溴化乙锭是一种诱变剂并能造成环境污染，操作时应戴手套，并且妥善处理。 |
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