质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法

细菌克隆

LB培养基抗生素STET溶液卵清溶菌酶水异丙醇TE缓冲液

1.  接种一个单菌落于5 ml LB培养基中，于37°C培养至饱和状态或至少到对数生长中期（约6 h）。

2.  取1.5 ml菌液以最大转速离心20 s，弃上清。

3.  加入300 μl含200 μg溶菌酶的STET溶液重悬沉淀。在涡旋混合器上振荡混匀，冰上放置 30 s~10 min。

4.  将管放人沸水中（100°C）1-2 min。

5.  离心15-30 min，吸上清移入一个新的微量离心管中。

6.  加人200 μl预冷的异丙醇，于-20°C放置15-30 min。

7.  以最大转速离心 5min，倒转离心管，弹数次，去除上清，真空干燥直至沉淀呈透明。

8.  沉淀溶于50 μl TE缓冲液中，于4°C短期保存，于-20°C或-70°C长期保存。取5 μl进行限制酶酶切分析。

1.  为了获得高产量的DNA，一定要使菌体完全重悬。

2.  如有必要，往待消化混合液中加人10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶，见3. 10)以去除 污染的RNA。

1.  参考文献：Birnboim，1983； Heetal., 1991; Holmes and Quigley, 1981.

2.  撰稿人：JoAnneEngebrecht, Roger Brent, and Mustak A, Kaderbhai