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质粒DNA导入细菌细胞实验——一步法制备感受态细菌实验

2019.3.26
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
试剂、试剂盒

TSS

仪器、耗材

培养基平板

实验步骤

1.  准备新鲜的过夜菌。按1:100的比例将过夜培养的菌液加入到新鲜的LB培养液中，于37 °C培养至OD600为0.3~0.4。

2.  加人等体积冰冷的2 X TSS于菌液中，在冰上温和地混匀。

3.  可以将菌液分成小份用干冰/乙醇浴冻存，于-70 °C长期保存。用冻存感受态细菌进行转化时，冻存菌要缓慢融化，并立即使用。

4.  为检测感受态的效果，按照步骤将<10 ng的pBR322转化到100 μl感受态细菌。按照CaCl2转化法的步骤8涂平板和计算转化效率。

转化效率大约为107~108转化子/μg DNA。

5.  迅速融化冻存菌，将100 μl感受态细菌和1~5 μl DNA （0.1~100 ng）加入到一个冰冷的聚丙烯管或玻璃管中，4°C放置5~60 min。

6.  加入0.9 ml含20 mmol/L葡萄糖的LB培养液，37°C温和振荡培养30~60 min。

7.  在平板上挑选转化体并保存。


质粒dna
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