单病毒感染OST7-1细胞
实验方法原理 | OST7-1 细胞来源于鼠 L929 细胞,能在细胞质中持续表达噬菌体 T7 RNA 聚合酶,因此,应用此细胞系无需用 vTF7-3 感染细胞。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | 完全 MEM-2.5 培养基完全MEM-10培养基(含有 400 μg ml Geneticin)胰酶(2 × 结晶无盐 过滤除菌后冻存于 -20℃) |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 用含有 400 μg/ml G418 的完全 MEM-10 培养基以 1 × 106 个 OST7-1 细胞/孔加入 6 孔组织培养板培养,直至细胞汇片生长(一般过夜)。 含有 G418 的完全 MEM-10 培养基用于维持细胞培养,但 G418 在表达实验中并不需要。 2. 混合等体积的病毒储液(10 pfu/细胞)和 0.25 mg/ml 胰酶,涡旋混匀。温育 30 min,每隔 5~10 min 晃动一次。 3. 将胰酶处理后的病毒用 MEM-2.5 培养基稀释至 2×107 pfu/ml。 4. 用 0.5 ml 的病毒混合液感染 6 孔板中每孔汇片生长的 OST7-1 细胞,温育 1~2 h, 每隔 15~30 min 晃动一次。 5. 每孔加入 1.5 ml 完全 MEM-2.5 培养基,继续培养。 6. 感染 3~24 h 后,分析细胞(见「两种重组痘苗病毒共感染细胞」步骤 1.6 的注解)。 收起 |
注意事项 | 1. 所有培养都在加湿的 37℃ 5% CO2 培养箱中培养,除非有特殊说明。 2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的,操作也必须无菌。 |