核提取物的制备实验（二）

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2019.3.26

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从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。

实验材料	细胞核
试剂、试剂盒	KCl 高盐缓冲液
仪器、耗材	透析膜离心机
实验步骤	1. 按基本方案中歩骤1~7操作。 2. 将细胞核悬液分成5等份。在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1/3体积髙盐缓冲液，在第1份中加浓度最低（0.8 mol/l）的高盐缓冲液，其余各份中依次加入KCl浓度逐渐增髙（直到1.6 mol/l）的高盐缓冲液。轻轻混合30 min。 3. 25 000 g 离心30 min。将上清进行透析（见基本方案步骤10），直到加浓度最髙的那份核悬液的电导达到与透析液一致（100 mmol/l KCl）。各份提取物25 000 g 离心20 min。 4. 检测各份提取物的电导并测定蛋白质浓度（见基本方案步骤12）。用预定的方法分析提取物以确定最佳提取条件。

制备实验

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