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M13噬菌体衍生载体的制备实验——载体衍生法

2019.3.26
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

M13噬菌体是一种丝状噬菌体,感染宿主后不裂解细菌细胞,只利用细胞内物质完成自身增殖,组装成完整病毒颗粒后被宿主细胞分泌而出,宿主细胞仍能继续生长分裂。为分子生物学中理想的质粒载体。基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失活插入外源DNA片段,也不会影响M13DNA的复制,这为M13DNA构建克隆载体提供了条件。


实验材料

质粒

试剂、试剂盒

YT培养基

仪器、耗材

离心机分光光度计摇床

实验步骤

1.  将来自一个单菌落的过夜培荞新鲜菌液按1 :50稀释,在含有适当抗生素的2xYT培养液(1~5 ml)中,于37℃培养至OD600=0.1。

2.  按1,10,20,50 MOI感染细胞,于37℃剧烈振荡下培养4.5 h。

 

3.  4 000 g 离心10 min,收集上请液并于65℃加热灭活15 min。

 

4.  从上清液中提取单链DNA,在琼脂糖凝胶上分析单链DNA,并用辅助噬菌体作为对照。


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