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生物素酰化探针的制备实验——随即寡核苷酸引物合成法

2019.3.26
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

DNA

试剂、试剂盒

dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇

仪器、耗材

离心机培养箱

实验步骤

1.  在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至总体积为34 μl。
 
2.  在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。

3.  按顺序加入下列溶液：


（1）10 μl  生物素酰化随即多聚体

（2）5 μl  dNTP/生物素混合物

（3）1 μl  klenow酶（5U）


（4）37℃温育1 h。
 

4.  加入3 μl 0.5 mol/l EDTA pH8.0以终止反应。加入5 μl 4 mol/l LiCl和150 μl 冰冷的无水乙醇，置于冰浴30 min。

5.  室温高速离心10 min，沉淀用70%乙醇洗涤。

 

6.  DNA用20 μl pH7.5的TE缓冲液重悬。用比色法或化学发光法估价生物素酰化反应的效果。


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