目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术,回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。
实验方法原理 | 本方法特别适合于PCR片段的回收,具有纯度高、操作简洁等特点,经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程,PCR产物即能被有效地从含引物二聚体、非特异性扩增引物片断等混合物中分离出来,成为高度无盐的、不含其他大分子成分的纯化片断。在较宽的分子量范围内有较高的回收效率。下表为不同长度的DNA片断,在室温条件下,用此纯化系统直接纯化时,各自相应的回收率。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、从琼脂糖介质中纯化DNA片断
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注意事项 | 1. 对于>3 Kb 的片断在纯化回收时,洗脱前,如先将水或TE缓冲液预热到65-80℃,则将能有效的提高回收率。待洗脱片断>3 Kb 时,洗脱液温度应为65-80℃;待洗脱片断>20 Kb 时,洗脱液温度应达80℃。
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