| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液细胞培养液细胞外缓冲液有渗透性的37℃缓冲液链球菌溶血素 O 工作溶液ATP 储存溶液[γ-32P] ATP研究用药理试剂受体激动剂2 × 冰裂解缓冲液蛋白抑制剂储存溶液 |
| 仪器、耗材 | 4℃ 浴式超声仪沸水浴干冰 乙醇浴多细胞皿架 37℃ 无循环水浴箱50 ml 离心管台式离心机细胞刮片带螺旋盖的微量离心管 |
| 实验步骤 | 实验材料、试剂、仪器参见基本方案。 1. 制备细胞并进行渗透性处理和标记（见基本方案步骤 1~8）。 2.1 贴壁细胞培养。快速吸尽有渗透性的缓冲液，在每板中加入 100~250 ℃ 预冷的 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片迅速刮离细胞于缓冲液中，转移细胞样品至新的旋盖离心管中。 2.2 悬浮细胞培养。在微量离心反应管中以最大速度离心 1 min, 室温。迅速吸尽上清，小心操作，切勿搅散细胞团块。每管中加入 100~250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液，涡旋，充分混匀。 3. 如果因 DNA 从核释放使样品很黏稠，可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中，冰浴，超声作用 5 min。 4. 将样品管放入沸水浴 3 min , 按每孔 50 将样品加入 SDS-PAGE 电泳胶中，电泳。 展开 |
| 注意事项 | 步骤 2 中精确把握离心时间非常重要，否则将会影响实验的重复性。 |
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