| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 4℃ 双向-PAGE裂解缓冲液双向-PAGE样品缓冲液细胞培养液细胞外缓冲液有渗透性的37℃缓冲液链球菌溶血素 O 工作溶液ATP 储存溶液[γ-32P] ATP研究用药理试剂受体激动剂 |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 |
实验材料、试剂、仪器参见基本方案。 1. 制备细胞并进行渗透化处理和标记（见基本方案步骤 1～6)。 2.1 贴壁细胞培养。快速吸掉有渗透性的缓冲液，每孔中加入 100～250 μl 4℃ 预冷的双向-PAGE 裂解缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片刮离细胞于缓冲液中，将细胞样品转移到新的旋盖离心管中。 2.2 悬浮细胞培养。室温，最大速度离心 1 min，迅速吸出并弃去上清。小心操作，切勿搅散细胞团块。加入100～250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液到每管中，涡旋， 充分混匀。 3. 如果因 DNA 的影响样品很黏稠，可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中，冰浴， 超声作用 5 min。在干冰/乙醇浴中冷冻样品，然后在冻干机上冻干。 4. 将冻干样品重溶于 50～100 ml 的双向-PAGE 样品缓冲液中。加热样品至 37℃， 3～5 min，将10～20 μl 的样品加到制备好的等电聚焦电泳胶上。 |
| 注意事项 | 在步骤 2 中精确把握离心时间非常重要，否则，将会影响实验的重复性。 |
首页
