当蛋白质在保持其天然构型不变的条件下进行电泳时，其迁移率可以作为它的均一性的一种量度。由于迁移率是电荷和形状两者的函数，因此可以预期，能将单体、二聚体等形式彼此分开。也有可能因异构体形状的差异而用非变性凝胶电泳把蛋白质的构象异构体（conformational isomer) 分开。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。
| 试剂、试剂盒 | 核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物σ32非变性胶样品缓冲液储存缓冲液考马斯亮蓝（CBB) 染色液脱色液 |
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| 仪器、耗材 | 非变性凝胶电泳装置 |
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| 实验步骤 | 材料与设备
核心 RNA 聚合酶
核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物，由免疫亲和柱洗脱所得
σ32，由 POROS 50S 阳离子交换柱洗脱所得
非变性凝胶电泳装置
试剂
非变性胶样品缓冲液（2X)(同 SDS 样品缓冲液，但不含 SDS。)
储存缓冲液
考马斯亮蓝（CBB) 染色液
脱色液
(配方，见"试剂的配制"，PP.184~189)
操作程序
1) 制备非变性胶（如，4%?12% 胶），带 10 个泳道。
注：有几家制造厂商（如，NOVEX) 出售的供 SDS-PAGE 用的梯度 Tris-甘氨酸小胶 (minigel) 实际上是不含 SDS 的。逋常，电泳过程中 SDS 是从电极液和样品缓冲液进入凝胶的，只要这些缓冲液中不含 SDS, 这些凝胶就能相当容易地以非变性的方式进行电泳。
2) 取各蛋白质样品 1~10ul, 加入 5~9ul 的储存缓冲液中，再加 10~20ul 的 2X 非变性胶样品缓冲液。混匀。建议按下表列出将各样品及其合适的蛋白量。
3) 每孔各加 20ul 样品，跑电泳，CBB 染色后脱色。
注：高效液相色谱 (HPLC) 法中的凝胶排阻色谱法也可用来测定蛋白质大小的不均一性。如本单元方案补充实验一节所述。 展开 |
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