酵母提取物的制备实验

2019.3.29

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实验方法原理	酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。
实验材料	新鲜培养的酵母细胞
试剂、试剂盒	裂解缓冲液（RIPA缓冲液）PBS
仪器、耗材	预冷的玻璃珠
实验步骤	①在微型离心机上离心3mm，以收集细胞。 ②去上清，用PBS重悬细胞，再离心3min。 ③去上清，估算细胞沉淀的体积，向细胞沉淀中加人3倍体积的冰浴裂解缓冲液，悬浮后置于冰上。 ④加入等体积的预冷玻璃珠。 ⑤剧烈振荡悬浮液30s。 ⑥重复步骤⑤，并在相差显微镜下观察，直到大部分酵母细胞被裂解。 ⑦4℃条件下在小型离心机中离心悬浮液5min， ⑧小心地倒出上清，并转移到另一管中，置于冰上备用。展开
注意事项	器材预处理：将玻璃珠在1mol/L的HCl中洗两遍，然后在裂解缓冲液中洗两遍。将洗过的玻璃珠液泡于4℃条件下储存在少量的裂解缓冲液中。

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