细胞凋亡的形态：生化性质实验——台盼蓝染色

2019.3.30

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实验方法原理
实验材料	细胞
试剂、试剂盒	染料混合物：0.01%台盼蓝 l00μg ml吖啶橙或 100μg ml吖啶橙+100 μg ml溴化乙锭所有试剂都在PBS中制备约5×105〜5×106细胞 ml的细胞悬浮液在完全的RMPI 1640培养基
仪器、耗材	12 mm×75 mm的玻璃试管显微镜载玻片和22 mm2的盖玻片配有荧光过滤装置的荧光显微镜
实验步骤	1a)将10〜20μL的台盼蓝放至12 mm×75 mm的玻璃试管的底部。加入等量的混合很好的细胞悬浮液，轻动手腕轻柔地混合。 2a)将10μL的混合液加入一标准血细胞计数器的凹槽里。用一明场显微镜的40×〜60 ×的干物镜检查。 3a)计数至少200个细胞，记录正常和凋亡或死亡细胞的数量。早期凋亡时细胞由于台盼蓝的排斥呈现白色，但它们将会有不规则的形状或缩拢的核。 4a)计算凋亡细胞的百分比（凋亡指数）如下：调亡细胞％ = (VN+NVA)/(VN+VA+NVN+NVA) ×100% 坏死细胞％ =NVA/(VN+VA+NVN+NVA)× 100% 死亡细胞％=(NVN+NVA)/(VN+VA+NVN+NVA)× 100% 展开
注意事项	除非细胞用于流式细胞仪或其他不需要细胞进一步体外培养的处理方式，所有的和细胞接触的溶液及仪器都必须是无菌的，需采取相应的无菌技术。

台盼蓝染色

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