丙酮酸脱羧酶的测定实验

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2019.3.30

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理	在酶测定中二氧化碳的释放可以用压力计或 ¹⁴C1-丙酮酸盐测定。在此将描述一个与ADH 有关的实验。
实验材料	酶样品
试剂、试剂盒	柠檬酸缓冲液丙酮酸焦磷酸硫胺素 MgCl2 NADH ADH
仪器、耗材	分光光度计
实验步骤	实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品记录 340 nm、25℃ 处吸光值的减少，ε_340＝6.3×10³ l/（mol·cm）。展开
注意事项
其他	试剂： 0.2 mol/L 柠檬酸缓冲液，pH 6.0 1 mol/L 丙酮酸（丙酮酸钠，Mr＝110.0；1.1 g 溶于 10 ml H₂O） 0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素（ThDP，脱竣辅酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml H₂O） 0.1 mol/L MgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml H₂O） 0.01 mol/L NADH（二钠盐，Mr＝709.4；71 mg 溶于 10 ml H₂O） ADH 来自酵母（20 mg/ml）展开

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